高效液相色谱分析法中为什么要采用梯度淋洗
梯度淋洗，就是程序洗脱，简称就是梯度。
主要就是变化流动相比例。主要目的就是为了分离样品，其次还有减短分析时间，改善峰型，提高灵敏度等等。
比如这个梯度，流动相A是磷酸盐水相，B是乙腈
保留时间（min） 乙腈（%）
0 10
20 30
30 30
32 10
40 10
相当于这种状态
就是从0-20min这段时间，逐步往里面加入乙腈，这样的话有助于极性相似的物质分离。如果是里面有一个极性比较小的物质，那么乙腈量增大，这个物质出峰时间就会提前。减短了分析时间。
当被分离组分较复杂时，等梯度洗脱难以将组分很好的分离并完全洗脱，就得考虑梯度洗脱了。液相色谱的梯度洗脱作用类似于气相色谱的程序升温，总之，为了达到更好的分离效果。
色谱法（chromatography）又称色谱分析、色谱分析法、层析法，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。1、色谱的起源
色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米哈伊尔•茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为数条平行的色带。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨维特将这种方法命名为chromatography，这个单词最终被英语等拼音语言接受，成为色谱法的名称。汉语中的色谱也是对这个单词的意译。
色谱法
茨维特并非著名科学家，他对色谱的研究以俄语发表在俄国的学术杂志之后不久，第一次世界大战爆发，欧洲正常的学术交流被迫终止。这些因素使得色谱法问世后十余年间不为学术界所知，直到1931年德国柏林威廉皇帝研究所的库恩将茨维特的方法应用于叶红素和叶黄素的研究，库恩的研究获得了广泛的承认，也让科学界接受了色谱法，此后的一段时间内，以氧化铝为固定相的色谱法在有色物质的分离中取得了广泛的应用，这就是今天的吸附色谱。
简述高效液相色谱在药物分析中的作用。
答：3．在含量测定中的应用：用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰。中药材及其制剂组成复杂，其中不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了高效液相色谱法。4．高效液相色谱在药物残留测定上的应用：由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量分析，故被广泛...
高效液相色谱中,为何要校正峰高?
答：在实际样品分析中，样品的浓度、基质效应以及其他实验变量可能会导致峰高发生变化。例如，样品中的其他化合物可能会干扰目标化合物的检测，导致峰高发生变化。高效液相色谱的峰高也受到色谱条件（如流动相组成、流速、柱温等）的影响。如果这些条件发生变化，可能会导致峰高发生相应的变化，从而影响定量结果的...
高效液相色谱分析法中为什么采用梯度淋洗
答：主要就是变化流动相比例。主要目的就是为了分离样品，其次还有减短分析时间，改善峰型，提高灵敏度等等。比如这个梯度，流动相A是磷酸盐水相，B是乙腈 保留时间（min） 乙腈（%）0 10 20 30 30 30 32 10 40 10 相当于这种状态 就是从0-20min这段时间，逐步往里面加入乙腈，这样...
为什么高效液相色谱前必须要进行除气?
答：用于高效液相色谱的流动相必须事先除气，否则容易在系统中逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性，甚至使其无法检测。噪音增加，基线不稳定，突然跳跃。此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。溶解气体也会引起溶剂ph值...
在高效液相色谱实验前,为什么溶剂和样品都要过滤?
答：你说的过滤：一方面可以去除溶剂和待测样中的悬浮颗粒物，避免对溶剂管路、溶剂泵（蓝宝石活塞，很贵的）、分离柱等造成损伤和堵塞；另一方面过滤一般采用滤膜抽滤，可以起到抽负压去除溶剂中空气的作用，防止气体进入分离柱、检测器等造成分离效果降低和基线不稳等问题。此外，也可以起到溶剂混匀的作用。
高效液相色谱仪做标准曲线时为什么要稀释?
答：2.0mg/ml的样品，然后按照浓度由低到高的顺序进样分析。（由低到高是避免系统误差）注意：这里是配制一份样品，稀释成若干线性用的样品。一般至少5个浓度。然后可以在excel上形成散点图。然后添加趋势线，并且显示R2和公式。这个y=97.04x+0.0498就是这个线性公式，R2是相关系数，如下图所示：...
为什么要对高效液相色谱仪定量?
答：高效液相色谱仪定量分析是一种相对分析，是通过对已知含量的物质和待测样品在相同条件下进行分析，得到数据后进行对照计算，推算出含量的。题中已经知道未知含量物质的峰面积后，还无法得到含量，如果需要得到绝对含量数据，还需要将一个已知含量的样品（标准样品）在同一条件下进行一次分析，得到相同物质组份...
hplc为什么要进行阴性测定
答：高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的...
在高效液相色谱中,为什么要对流动相脱气
答：你指的是流动相脱气，还是仪器排气？两者的主要目的是一样的，都是为了防止气泡进入仪器。泵如果进了气泡，可能会堵塞，进而仪器瘫痪。色谱柱也会堵住导致报废。检测器进了气泡，影响检出。流动相脱气是为了脱去溶解在流动相液体里面的气体。仪器purge排气是为了排掉溶剂过滤头到泵前管路里面的气体。
为何要在高效液相色谱分析之前要对仪器性能指标进行检测?
答：高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析方法，用于分离和检测复杂混合物中的各种组分。在进行HPLC分析之前，对仪器性能指标进行检测非常重要，原因如下：仪器性能指标的准确性对于获得可靠的分析结果至关重要。如果仪器的性能指标不佳，可能会导致分析结果偏离实际值，从而影响我们对样品中组分含量的准确...
