液相色谱在分析化合物时,为什么实验前要冲洗色谱柱
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1.色谱柱简介
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm（1nm=10埃）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
2.色谱柱的冲洗体积确定
一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。举例：内经为4.6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。
3.色谱柱冲洗
冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。最好是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。
4.色谱柱维护冲洗
常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相；b、过滤样品；c、运用在线过滤或保护柱。
柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）；b、使用保护柱 ；c、使用预柱（饱和色谱柱）。
前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。
5.特殊冲洗 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法：
1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。
3.补救方法：
水——乙腈——氯仿（或异丙醇）——乙腈——水
每一步以 1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱 60min。
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GP-C18 Bio-C18 Amethyst(紫晶) 色谱柱-美国赛分-sepax-北京康农兴牧
常规用途分析型液相色谱柱 >> 反相液相色谱柱（RPLC）介绍：
GP-C18色谱柱(GP-C8,GP-C4详见产品手册) •方法开发的首选柱，
•高度可控的单分子层形成和封尾技术
•高的柱间重现性
•高的选择性和分离效率
•适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及许多药物、多肽等
•推荐使用有机溶剂或有机溶剂/水体系的流动相
可替代Symmetry C18、LunaTMC18、Symmetry Shield RP18、LunaTMDiscoveryTMC18、Zorbax Eclipse XDB C18、Inertsil ODS-2 ODS-3、SupelcosilTMLC-18-DB、Kromasil C18、lTSKgel ODS-100Z
GP-C18以全覆盖的键合硅胶为填料，具有优异的稳定性。独特的单官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和高效率的分离特点。
GP-C18填料技术参数
硅胶：球形,高纯度(<10ppm金属杂质)
孔径：120Å
粒径：1.8、2.2、3、4、5、7和10µm
孔体积：1.0mL/g
比表面积：300m²/g
固定相结构：单层全封尾
碳载量：17%
PH值范围：2-11
HP-C18色谱 柱
•可使用100%的水相做流动相
•高度可控的单分子层形成和封尾技术
•高的柱间重现性
•高的选择性和分离效率
•适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及许多药物、多肽等
可替代AquasilC18、ArlantisTM、Zorbax SB-Aq SynergiHydro-RP、HydroBondPS C18、HydroBond AQ、UltraAqueous C18、ProntoSIL C18 AQ、YMC-Pack ODS-AQ、EliteSino ChromODSBP TSKgelODS100V HP-C18填料技术参数
硅胶：球形,高纯度(<10ppm金属杂质)
孔径：120Å / 200Å（用于大分子）
粒径：3、4、5、7、10µm / 3、5、10µm
孔体积：1.0mL/g
比表面积：300m²/g /200m²/g
固定相结构：单层全封尾
碳载量：17% / 10%
PH值范围：2.0-9.0
BR-C18色谱柱
•高度可控的单分子层形成和封尾技术
•高的柱间重现性
•高的选择性和分离效率
•宽的pH适用范围1.5-10.5
•适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及许多多肽和蛋白等
可替代Zorbax Extend C18 Vydac218TP C18; ;Jupite300 C18 BR-C18填料技术参数
硅胶：球形，高纯度(<10ppm金属杂质)
孔径：120Å
粒径：3、5和10µm
孔体积：1.0mL/g
比表面积：350m²/g
固定相结构：单层全封尾
碳载量：19.5%
PH值范围：1.5-10.5
Bio-C18色谱柱
Bio-C18填料有200和300Å两种孔径规格，适合于肽段的指纹图谱识别，天然和人工合成多肽以及低分子量蛋白等的分离。所采用的化学键合技术可以确保ODS单分子层不会在纯水溶液中发生塌陷。
•高度可控的单分子层形成和封尾技术
•高的柱间重现性
•高的选择性和分离效率
•可使用纯水作为流动相
•适合分离多肽、蛋白以及许多药物等
可替代XterraC18;XbridgeC18 Bio-C18填料技术参数
硅胶：球形,高纯度(<10ppm金属杂质)
孔径：200Å / 300Å
粒径：3、4、5和10µm / 3和5µm
孔体积：1.0mL/g / 0.95mL/g
比表面积：200m²/g / 105m²/g
固定相结构：单层全封尾
碳载量：10% / 7%
PH值范围：2.0-9.0
Amethyst(紫晶) P分析型液相色谱柱
通用型C18，推荐中药分离选择此柱。
• 采用高度可控的单官能团键合和封尾技术
• 高的柱间重现性
• 高的选择性和分离效率
• 可在pH 1.5-9.0范围内使用
• 适合分离许多药物分子以及多肽等
• 可用100%水作为流动相
Amethyst C18-P填料技术参数
硅胶：球形,高纯度(金属杂质<10ppm)
孔径：120Å
粒径：3、5和10µm
孔体积：1.0mL/g
比表面积：300m²/g
固定相结构：单官能团全封尾
碳载量：20.0%
pH值范围： 1.5-9.0
Amethyst(紫晶) H分析型液相色谱柱
Amethyst C18-H 一般用途C18 ，推荐西药如抗生素药的分离选择此柱。
• 采用高度可控的单分子层形成和封尾技术
• 高的柱间重现性
• 高的选择性和分离效率
• 最高可耐受pH值至11
• 可在pH 1.5-10..5范围内使用
• 适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及多肽和蛋白等 Amethyst C18-H填料技术参数
硅胶：球形,高纯度(金属杂质<10ppm)
孔径：120Å
粒径：3、5和10µm
孔体积：1.0mL/g
比表面积：350m²/g
固定相结构：三官能团单分子层全封尾
碳载量：19.0%
pH值范围： 1.5-10.5
Sapphire(宝石)分析型液相色谱柱
Sapphire C18 复杂样品的分离
• 采用高度可控的单分子层形成和封尾技术
• 高的柱间重现性
• 对疏水和亲水化合物都具有高选择性和分离效率
• 与其它C18填料相比具有更大的比表面积，更长的样品保留时间，以及更高的上样量
• 特为碱性化合物如胺类等的分离而设计
• 可用纯水作为流动相
• 适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及许多药物分子和多肽等 Sapphire C18填料技术参数
硅胶： 球形,高纯度(金属杂质<10ppm)
孔径：100Å
粒径：3、5和10µm
孔体积：1.05mL/g
比表面积：450m²/g
固定相结构：单官能团全封尾
碳载量：17.0%
pH值范围： 1.5-9.0
体积排阻柱 SRT-SEC SRT-SEC 可完全替代TSK 凝胶柱。
SRT SEC固定相是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质，表面化学键合有一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜。该固定相的合成采用赛分公司独有的表面化学键合技术，可确保柱与柱之间的高度重现性。SRT SEC固定相具有高的化学和机械稳定性，与生物分子等之间的非特异性相互作用也很小。孔径规格有100、150、300、500、1000和2000Å，可确保高分离容量分辨率
Nanofilm-SEC Nanofilm-SEC 针对柱容性蛋白，解决TSK 寿命问题的色谱柱，使用寿命更长。
Nanofilm SEC固定相是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质，表面化学键合有一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜。该固定相的一个特点是可使用低盐浓度，或含有机溶剂的缓冲液作为流动相进行生物样品的分离，并具有高的分辨率和样品回收率。该色谱填料为窄粒径分布的球形硅胶颗粒。孔径规格有150、250、450和950Å。
离子交换柱 硅胶基质 HP-SCX 推荐用于盐酸二甲双胍的分析新康泰克药物的分析
HP-SAX 推荐用于核苷类物质的分析草柑膦的分析
聚合物基质 Proteomix离子交换色谱柱
推荐用于蛋白质、低聚核苷酸和多肽的分离而设计，具有高分辨率、高效率和高回收率的特点。
Sepax 首创1μm颗粒制造技术。专利技术的表面修饰，不但消除固定相与提高了生物分子之间的非特异性互相作用同时有效的无孔填料的吸附容量，从而使色谱柱在应用中具有极高的柱效和回收率
液相色谱在分析化合物时，实验前要冲洗色谱柱是为了去除误差。液相色谱以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中。为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。
经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。
直到20世纪60年代，发展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高压输液泵和自动记录的检测器，克服了经典液相色谱的缺点，发展成高效液相色谱。
扩展资料
液相色谱能完成难度较高的分离工作：
a.气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，基本不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子主要与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选择不同比例的两种或两种以上的液体做流动相，增加分离的选择性。
b.液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时，选择余地大；而气相色谱并不可能。
c.液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。
参考资料来源：百度百科-高效液相色谱仪
液相色谱原理
答：一、原理：高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论，色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成，造成的结果就是色谱柱的柱效远远高于原始的经典液相色谐，它柱子使用后还能具有高度灵敏度检测器。能够对流出来的分析物进行连续检测。色谱仪是利用混合物各组分在固定相和流动相...
如何确保高效液相色谱- UV法准确可靠?
答：1. 在使用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定化合物含量时，化合物的化学稳定性是基本要求，确保在色谱分析过程中不会发生降解或反应，从而保证分析结果的准确性。2. 化合物的分子结构应当具有一定的对称性，这有助于提高色谱柱中化合物的扩散系数，使得分离更为均匀，便于准确测定含量。3. 化合物...
液相色谱原理
答：据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70～80%。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相...
液相色谱分析时峰拖尾是哪里有问题
答：分析碱性化合物时，碱性化合物的峰拖尾可能是硅胶表面存在酸性硅醇基引起的，在流动相中加入三乙胺即可解决;分析酸性化合物时，在流动相中加入三氟乙酸或乙酸可以解决。如果是因为试样太稀产生拖尾，在这种情况下可以改用浓度大一点的试样，很快就可解决。另外也有可能是色谱柱接头处产生漏液引起的峰拖尾，...
高效液相色谱分析法的原理是什么?
答：若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱...
hplc原理
答：hplc原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。高效液相色谱仪是应用高效液相色谱原理，主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、...
高效液相色谱原理
答：高效液相色谱（HPLC）的原理：以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。高效液相...
一个化合物进质谱为什么在液相中不显色
答：可能是物质的极性小（如果是反相色谱），出峰时间非常晚。3.操作方法的问题。你的样品是不是确定进的是待测样品？有时候会有一些失误。比如自动进样，样品瓶错了，样品盘错了都有可能的。再或者，有些物质的吸收很低，样品浓度低，进样量少，物质可能出峰了，但是峰非常非常小，没有看到。
高效液相色谱法具体原理是什么
答：据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。二、性质及原理：高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分...
高效液相色谱的原理
答：在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或...
