怎么样用梯度洗脱把两个重叠的峰洗开
要做梯度试验用同二抗浓度试验待测品浓度梯度空白照评价指标：空白照OD值线性范围阳性OD值与空白照OD值比值（差值）等等视应用需求定
这样的提问没有意义
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①要注意溶剂的互溶性,不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在...③混合溶剂的粘度常随组成而变化,因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。
高效液相如何使用
答：所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在345kPa以内（在使用梯度洗脱时，柱压平稳、缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都属于柱压问题。2.1.1 压力过高 这是高效液相色谱仪在使用中最常见的...
吸附薄层层析与分配,离子交换薄层层分析的区别
答：吸附层析固定相是固体吸附剂，利用各组分在吸附剂表面吸附能力的差别而分离 分配层析固定相为液体，利用各组分在两液相分配系数的差别或溶解度不同使物质分离 离子交换层析固定相为离子交换剂，利用各组分对离子交换剂的亲和力不...
高效液相色谱一次能分离几个样品?或者说一个粗提物中,用高效液相色谱一 ...
答：高效液相色谱可能一次性分离几十个样品，至于一次能否把所有成分分离出来，关键还是要看具体的物质成分了，这个至于物质本身与色谱填料两个性质有关，其他的，如调节流动相等，仅是能优化使得分离度更好。这个问题没有具体的物质...
高效液相色谱方法及应用的目录
答：储液罐二、流动相脱气第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置一、高压输液泵二、输液系统的辅助设备三、梯度洗脱装置第三节 进样装置一、停流进样装置二、六通阀进样装置三、自动进样器第四节 色谱柱一、柱材料及规格二、柱...
超高液相时候不小心进样针把样品瓶给穿透了,怎么办啊?
答：一般国产的进样针都是不太密封的。针头是不是那种灰白色的像塑料一样材质的？那个一定要留好。可以去换一个好一点的注射器，然后接在进样针上面。一般玻璃注射器很容易不紧，漏气。所以如果是用纯水做溶剂的样品，可以用...
蛋白质分离鉴定的常用方法有哪些
答：显然,通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力(其大小有差异)时,采用选择性缓冲液进行洗脱,也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后,可以重复使用。 上面介绍的...
...想问是冲有问题的通道?还是怎么做,求具体操作步骤
答：首先说一下原理：异丙醇的粘度比较高。如果是不溶性微粒，或者气泡之类的东西堵住了管路，异丙醇可以把他们粘下来。第二，如果是比例阀堵了。建议四个管路都冲，每个管路25%。如果是某一个管路堵了，那就单独冲洗这一个...
液质联用的发展历程
答：不会发生ESI 过程中因形成多电荷离子而发生信号重叠、降低图谱清晰度的问题;适应高流量的梯度洗脱的流动相;采用电晕放电使流动相离子化,能大大增加离子与样品分子的碰撞频率,比化学电离的灵敏度高3 个数量级;液相色谱-大气压化学电离串联...
屠呦呦发现青蒿素的艰辛历程是怎么样的?
答：屠呦呦的研发对人类的生命健康贡献突出，她的研究跟所有其他科研成果都不同，为科研人员打开了一扇崭新的窗户。屠呦呦不论是从学术上还是生活上都是一个很了不起的人。作为获奖人，她的经历是独一无二的。
测邻苯二甲酸的紫外吸收时为什么用标样进行测试
答：测邻苯二甲酸的紫外吸收用标样进行测试是因为，邻苯二甲酸酯可以通过呼吸、饮食和皮肤接触进入人和动物体内。急性吸入邻苯二甲酸酯蒸汽后，可出现上呼吸道和眼结膜刺激症状。皮肤长期接触会出现致敏反应。其急性毒性随分子中醇...
