高效液相色谱分析法中为什么要采用梯度淋洗
当被分离组分较复杂时，等梯度洗脱难以将组分很好的分离并完全洗脱，就得考虑梯度洗脱了。液相色谱的梯度洗脱作用类似于气相色谱的程序升温，总之，为了达到更好的分离效果。
梯度淋洗，就是程序洗脱，简称就是梯度。
主要就是变化流动相比例。主要目的就是为了分离样品，其次还有减短分析时间，改善峰型，提高灵敏度等等。
比如这个梯度，流动相A是磷酸盐水相，B是乙腈
保留时间（min） 乙腈（%）
0 10
20 30
30 30
32 10
40 10
相当于这种状态
就是从0-20min这段时间，逐步往里面加入乙腈，这样的话有助于极性相似的物质分离。如果是里面有一个极性比较小的物质，那么乙腈量增大，这个物质出峰时间就会提前。减短了分析时间。
流动相的成分直接与保留时间有关系，可以得到更好的条件
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梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗提。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩分析间周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。
梯度洗脱的原理： 流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
梯度洗脱特点： 提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
高效液相色谱仪做标准曲线时为什么要稀释?
答：做标准曲线首先有标准物质，然后有一个曲线的浓度范围。比如说，标准物质X，浓度是0.1mg/ml-2mg/ml。配制样品的时候，取X适量，配制成浓度为10mg/ml的母液，然后逐级稀释，配制成浓度为0.1mg/ml，0.2mg/m，0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml的样品，然后按照浓度由低到高的顺序进样分析。（由...
为何要在高效液相色谱分析之前要对仪器性能指标进行检测?
答：高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析方法，用于分离和检测复杂混合物中的各种组分。在进行HPLC分析之前，对仪器性能指标进行检测非常重要，原因如下：仪器性能指标的准确性对于获得可靠的分析结果至关重要。如果仪器的性能指标不佳，可能会导致分析结果偏离实际值，从而影响我们对样品中组分含量的准确...
在高效液相色谱实验前,为什么溶剂和样品都要过滤
答：你说的溶剂是溶解样品用的溶剂？还是说流动相？因为色谱柱里面是多孔结构，所以所有上液相的东西都要过滤。避免把色谱柱堵住。流动相主要是为了过滤掉气泡。尤其是反相色谱，水相和有机相混合很容易产生气泡。样品，包括样品，空白溶剂等等，过滤主要是为了滤掉不溶性微粒。比如样品不完全溶解，有悬浊的...
为什么高效液相色谱前必须要进行除气?
答：噪音增加，基线不稳定，突然跳跃。此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。溶解气体也会引起溶剂ph值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。常用的除气方法有加热沸腾、抽真空、超声波、吹氦等。高效液相色谱（hplc）是色谱的一个重要分支。以液体为流动相，高压输液...
高效液相色谱法测定时,流动相合样品均应先过滤和超声波,为什么
答：流动相需要过滤、超声，过滤是除去固体杂质或异物，同时驱除溶解的气体，超声进一步驱除溶解的气体。样品需要过滤，防止不溶性物质堵塞系统的管路，样品不需要超声，超声过程往往伴随温度升高，样品一旦温度升高液体的体积会改变，浓度发生变化，影响到结果的准确性。
高效液相色谱为什么要对hplc仪的性能指标进行检查
答：仪器使用一段时间后，各个部件会老化，仪器的各项性能指标肯定要比刚装机的时候差，作为检测人员应当知道自己使用的仪器的能力水平，以确保可以得到准确可靠的检测结果。
在高效液相色谱柱测定供试品溶液时为什么要取续滤液
答：初滤液不稳定，可能受到多种因素影响。比如滤纸，滤器的洁净度等。
高效液相色谱法精密度试验的意义
答：1、精密度也叫重复性、稳定性，是高效液相色谱非常重要的技术指标（其它分析、测试、检测等仪器应该也是这样吧），是每台仪器及分析方法都必须满足的指标。2、为了保证仪器或方法的可靠、稳定，适用、可用，实验中是经常要做精密度的测试的，只有精密度的数据满足要求，做出的结果才有意义。
高效液相色谱法的原理是什么?
答：高效液相色谱法有“四高一广”的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。③高效：分离效能...
为什么要学会高效液相色谱 仪的使用
答：③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品...
