梯度洗脱的介绍

什么是梯度洗脱~

梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH,以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。

梯度洗脱(gradient elution)又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。


在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。   梯度洗脱的优点:1.缩短分析周期;2.提高分离能力;3.峰型得到改善,很少拖尾;4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。


分级梯度洗脱
  分级梯度洗脱是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相是离子交换剂,它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。离子交换剂可以分为三部分:高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。电荷基团与高分子聚合物共价结合,形成一个带电的可进行离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子,它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用,称为阳离子交换剂;平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用,称为阴离子交换剂。

【梯度洗脱】又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。
进行梯度洗脱可以达到以下目的:
1、缩短分析周期;
2、提高分离能力;
3、峰型得到改善,很少拖尾;
4、增加灵敏度,但有时引起基线漂移。

梯度洗脱(gradient elution)又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。



液相色谱泵梯度曲线多一定比少的好吗
答:梯度洗脱配置相对复杂,现主要介绍下梯度洗脱的原理及洗脱要求:梯度洗脱的原理 具体地讲,当样品随梯度起点的流动相进入色谱柱入口时,由于起点流动相中弱洗脱溶剂A含量较高,强洗脱溶剂B含量较低,化合物C1(保留性适中)和化合物C2(保留较强)因分配系数(k值)较高而滞留于色谱柱入口附近,几乎未移动。...

系统介绍一下GST-pulldown
答:分析的蛋白质混合液流经亲和层析柱,梯度洗脱,分离、收集各蛋白组分,这称为GST亲和柱层析 (GST affinity column chromatography)。如果一开 始待检蛋白就和GST- 融合探针蛋白与 GTH-Sepharose一起共同孵育,经离心收集洗脱复 合物和洗涤后,再加入过量GTH获得相互作用蛋白 的复合物,那么这种方法则称...

...一下替考拉宁的提取方面的知识,麻烦知道的介绍一下
答:lmol/L NaOH调pH7.5,通入制备HPLC柱(硅烷化的硅胶柱),用10%~20%乙腈和0.2%甲酸铵混合溶液线性梯度洗脱,分步收集,经HPLC分析鉴定,合并其HPLC分布相似的溶液,减压浓缩除去有机溶剂。浓缩液再上制备HPLC,用50%乙腈洗脱,浓缩洗脱液后,加入丙酮一乙醚(1:1)可沉淀出T—A2一l和T—A'...

己酮可可碱的相关介绍
答:用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Zorbax C8 150×4.6mm柱适用);流动相A为0.544%磷酸二氢钾溶液-甲醇(7:3),流动相B为0.544%磷酸二氢钾溶液-甲醇(3:7);流速为1ml/min;检测波长为272nm;柱温为30℃,按下表进行梯度洗脱。量取对照品溶液20μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使己酮可可碱峰的峰高约为满...

广州西派克阀门有限公司的广州阀门类别阀门介绍
答:液相色谱中的低压梯度洗脱装置就是在高压泵之前加上一个比例阀,在常压下将几种溶剂按设定的比例在线混合之后,再泵入色谱体系。广州比例阀能实现自动控制、远程控制和程序控制。比例阀能把电的快速灵活等优点与液压传动功率大等特点结合起来。比例阀能连续地、按比例地控制执行元件的力、速度和方向,并能防止压力或...

液相色谱仪各种检测器的应用范围、越具体越好。谢谢
答:1、示差折光检测器(RID)是一种通用型检测器,只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收,一般常用示差折光检测器。它的通用性比UVD广,但灵敏度要低,对温度变化敏感,并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用。2、蒸发光散射检测器(ELSD)也是...

岛津液相色谱仪的岛津主要液相色谱仪产品介绍
答:组合方式 高压.低压梯度洗脱.溶液切换等多种形式数据处理 CLASS—VP(工作站)数据处理机C—R7A/C—R8A泵型LC-IOADvp微体积双柱塞 LC-IOATv串联双柱塞恒量输液流量设定范围 0.001-5ml/min[1.0-39.2MPa 5.001-9.999ml/min[1.0-19.6MPa]流量准确度 ±2%或±2ul/min(其中较大值)以内(O.01-5ml/min(LC-10A...

普鲁卡因青霉素简介,有什么功效?
答:流动相A为缓冲液(取磷酸二氢钾14g和40%氢氧化四丁基铵溶液6.5g,溶解于约700ml水中,用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至7.0,用水稀释至1000ml,混匀)-水-乙腈(52:28:20);流动相B为上述缓冲液(pH 7.0)-水-乙腈(52:18:30);先以流动相A等度洗脱,待普鲁卡因峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱,检测波长...

阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂简介
答:十八烷基硅烷键合硅胶(A型)为填充剂;流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0),流动相B为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0)-乙腈(20:80);检测波长为230nm;先以流动相A流动相B(98:2)等度洗脱,待阿莫西林峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱...

奋乃静的药典介绍
答:摇匀,作为对照溶液。照髙效液相色谱法(附录V D)试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.03mol/L醋酸铵溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱,检测波长为254nm 取奋乃静对照品25mg,置25ml量瓶中,加甲醇15ml溶解后,加入30%过氧化氢溶液2ml,摇匀,用甲醇稀释至刻度,...

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